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磺胺七合一檢測(cè)試劑盒

更新時(shí)間:2024-06-13

簡(jiǎn)要描述:

磺胺七合一檢測(cè)試劑盒經(jīng)營(yíng)原則是“質(zhì)量*,誠(chéng)信*",以“質(zhì)量是企業(yè)的生命,誠(chéng)信是經(jīng)營(yíng)的資本"為警醒,嚴(yán)把商品質(zhì)量關(guān),不做任何有損顧客利益的事情,經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠,完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系,優(yōu)秀的科研隊(duì)伍,的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,是您可靠的合作伙伴。

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                磺胺七合一檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)(酶聯(lián)免疫法)
 
1 原理及用途
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)組織、血清、蜂蜜、牛奶、尿液等樣本中的磺胺類藥物(Sulfonamides,SAs),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的磺胺類藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗磺胺類藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含磺胺類藥物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中磺胺類藥物的殘留量。
2 磺胺七合一檢測(cè)試劑盒技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.5ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,45min~15min
2.3 檢測(cè)下限:
組織(高檢測(cè)限方法)……………0.5ppb
組織(低檢測(cè)限方法)……………2.5ppb
血清、尿液…………………………2ppb
蜂蜜…………………………………0.5ppb
牛奶…………………………………10ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
藥物名稱
交叉率
靈敏度ppb
磺胺二甲基嘧啶(SM2)
100%
0.5
磺胺間甲氧嘧啶(SMM)
670%
0.07
磺胺甲基嘧啶(SM1)
313%
0.15
磺胺嘧啶(SD或SDZ)
308%
0.15
磺胺間二甲氧嘧啶(SDM)
175%
0.3
磺胺甲噻二唑(SMT)
165%
0.3
磺胺喹噁啉(SQX)
42%
1
 2.5 樣本回收率:
組織、蜂蜜………………………95±25%
尿樣、牛奶、血清………………85±25%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液:各1ml
0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
高標(biāo)準(zhǔn)液(紅蓋):1ppm…………1ml
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
2X復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml
說(shuō)明書(shū)………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、乙腈、Na2HPO4·12H2O、NaOH 、濃HCL 、NaH2PO4·2H2O 
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:0.2M  NaOH溶液
    0.8gNaOH用去離子水100ml溶解
配液2:0.02M  PB緩沖液
    稱取2.58g Na2HPO4·12H2O和0.44g NaH2PO4·2H2O加去離子水500ml溶解。
配液3:0.5M鹽酸溶液
    4.3ml濃HCL加入去離子水定容至100ml混勻。
配液4:乙腈-二氯甲烷混合液
    V乙腈:V二氯甲烷=1:4 
配液5:復(fù)溶液
    將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 組織樣本(高檢測(cè)限)處理方法一
1)稱取2±0.05g均質(zhì)組織樣本置離心管中,加入8ml乙腈-二氯甲烷混合液,振蕩2min,4000r/min以上離心10min;
2)移取4ml上層清澈有機(jī)相至干燥容器中,在50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?br />3)加正己烷1ml溶解干燥的殘留物,再加1ml復(fù)溶液,強(qiáng)烈振蕩1min,4000r/min以上離心5min;
4)去除上層正己烷,取50µl下層水相用于分析。  
    樣本稀釋倍數(shù):1    檢測(cè)下限:0.5ppb
5.3.2 組織樣本(高檢測(cè)限)處理方法二
1)稱取3±0.05g均質(zhì)組織樣本置離心管中,加入3ml 0.02M PB緩沖液充分振蕩混勻,再加入4ml乙酸乙酯和2ml乙腈,充分振蕩10min,于4000r/min以上速度離心10min;
2)移取2ml上層液體(約相當(dāng)于1g的樣本)在50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?nbsp;
3)加1ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加1ml復(fù)溶液,強(qiáng)烈振蕩1min,4000r/min,離心5min; 
4)除去上層正己烷,取下層水相50µl用于分析。 
    樣本稀釋倍數(shù):1    檢測(cè)下限:0.5ppb 
5.3.3 組織樣本(低檢測(cè)限)處理方法
1)稱2.0±0.05g 均質(zhì)組織樣本于離心管中;加入8ml 0.02M PB緩沖液,震蕩2min,4000r/min以上離心10min; 
2)取50µl液體用于分析。
    樣本稀釋倍數(shù): 5    檢測(cè)下限:2.5ppb  
5.3.4 血清樣本處理方法 
1)將血樣本于室溫放置30min,于4000r/min以上離心10min,分離出血清或過(guò)濾血清;
2)取1ml血清,加入3ml 0.02 M PB緩沖液混合,混合30s;
3)取50µl用于分析。  
    樣本稀釋倍數(shù):4    檢測(cè)下限:2ppb
5.3.5 蜂蜜樣本處理方法
1)稱取1±0.05g蜂蜜樣本于50ml離心管中,加入1ml 0.5M鹽酸置于37℃環(huán)境中30min;
2)加入2.5ml 0.2M 氫氧化鈉 (將PH值調(diào)至5左右)再加入4ml乙酸乙脂振蕩5min,4000r/min以上室溫離心10min;
3)取2ml上層液體于50-60℃下氮?dú)獯蹈?,?.5ml 已稀釋好的復(fù)溶液復(fù)溶,混合30s;
4)取50µl用于分析。  
    樣本稀釋倍數(shù):1    檢測(cè)下限:0.5ppb
5.3.6 尿樣本處理方法
1)用3ml 0.02 M PB緩沖液與1ml經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合,混合30s; 
2)取50µl液體用于分析。  
    樣本稀釋倍數(shù): 4    檢測(cè)下限:2ppb 
5.3.7 牛奶樣本處理方法
1)將牛奶樣本用0.02 M PB緩沖液20倍稀釋(如20µl牛奶+380µl 0.02  M PB緩沖液),混合30s;
2)取50µl用于分析。
    樣本稀釋倍數(shù):20    檢測(cè)下限:10ppb     
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)45分鐘。
6.3 洗    滌:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 顯    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
6.5 終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.6 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
 百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。
    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?br />8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

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