更新時間:2024-06-13
伏馬毒素B1檢測試劑盒經(jīng)營原則是“質(zhì)量*,誠信*",以“質(zhì)量是企業(yè)的生命,誠信是經(jīng)營的資本"為警醒,嚴(yán)把商品質(zhì)量關(guān),不做任何有損顧客利益的事情,經(jīng)濟(jì)、實惠、可靠,完善、穩(wěn)定的實驗體系,優(yōu)秀的科研隊伍,的實驗設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)果,是您可靠的合作伙伴。
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伏馬毒素B1檢測試劑盒使用說明書(酶聯(lián)免疫法)
1 原理及用途
伏馬毒素(Fumonisins)是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素,目前已知有28種衍生物,其中以伏馬毒素B1(FB1)zui為普遍,研究也zui為深入,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)玉米及其制品,如動物飼料均易被FB1造成污染。FB1毒性在伏馬毒素中zui強(qiáng),對多種動物有較嚴(yán)重的毒理作用。研究表明FB1可引發(fā)馬的白腦軟化癥,豬的肺水腫綜合癥,此外,還可誘發(fā)人類的食道癌和肝癌、胃癌等疾病,對畜牧業(yè)和人類的健康構(gòu)成危害。
試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的伏馬毒素B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗伏馬毒素B1抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含伏馬毒素B1含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較乘以樣本稀釋倍數(shù)即可得出樣本中伏馬毒素B1的殘留量。
2 伏馬毒素B1檢測試劑盒技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.5ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min
2.3 檢測下限:
玉米、飼料…………………………50ppb
食用油………………………………10ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
伏馬毒素B1…………………………100%
2.5 樣本回收率:
飼料…………………………………95%±15%
玉米…………………………………100±15%
食用油………………………………85±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml
0ppb、0.5ppb、1.5 ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
10X濃縮復(fù)溶液(黃蓋)……………50ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
說明書………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:甲醇
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:樣本提取液
70%甲醇,即V甲醇:V去離子水=7:3。
配液2:復(fù)溶液
將10×濃縮復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋,即:V(10×濃縮復(fù)溶液):V(去離子水)=1:9,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 玉米、飼料處理方法
1)稱取1g粉碎樣品于50ml離心管中,加5ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)取上清0.1ml,加入1.9ml復(fù)溶液,振蕩2分鐘;
3)取50μl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù):100 檢測下限:50ppb
(若樣本中伏馬毒素B1的含量較高,可在步驟2)按比例增大稀釋倍數(shù),檢測出的含量乘以樣本實際的稀釋倍數(shù)即為樣本中的含量)
5.3.1 食用油處理方法
1)稱取5ml樣品于50ml離心管中,加8ml正己烷和5ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)去除上層液體,取100ul下層液體加入1.9ml復(fù)溶液,混勻;
3)取50μl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù):20 檢測下限:10pp
6 酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實驗開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編 號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗 滌:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 顯 色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
6.5 終 止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.6 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?br />8 注意事項
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。
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