国产欧美va欧美va在观看_欧美变态口味重另类一区二区_性做久久久久久久免费看_亚洲激情不卡视频_国产精一级特级毛片

原理：

在不加條件下直接凍存細胞時，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。

細胞復(fù)蘇時速度要快，使之迅速通過細胞易受損的－5～0℃，細胞仍能生長，活力受損不大。目前常用的保護劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞。

操作步驟

一、凍存

1、消化細胞，將細胞懸液收集至離心管中。

2、1000rpm離心10分鐘，棄上清液。

3、沉淀加含保護液的培養(yǎng)，計數(shù)，調(diào)整至5×106/ml左右。

4、將懸液分至凍存管中，每管1 ml。

5、將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口，封口要嚴(yán)，否則復(fù)蘇時易出現(xiàn)爆裂。

6、貼上標(biāo)簽，寫明細胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細繩。

7、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘）→冰箱冷凍室（30分鐘）→低溫冰箱（－30℃ 1小時）→氣態(tài)氮（30分鐘）→液氮。

注意：操作時應(yīng)小心，以免液氮**。液氮定期檢查，隨時補充，不能揮發(fā)干凈，一般30立升的液氮能用1～1.5月。

二、復(fù)蘇

1、準(zhǔn)備一個茶缸或1000ml的燒壞，內(nèi)裝2/3杯37℃的溫水。

2、從液氮中取出凍存管、迅速置于溫水中并不斷攪動。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內(nèi)融化。

3、打開凍存管，將細胞懸液吸到離心管中。

4、1000rpm離心10分鐘，棄去上清液。

5、沉淀加10ml培養(yǎng)液，吹打均勻，再離心10分鐘，棄上清液。

6、加適當(dāng)培養(yǎng)基后將細胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，37℃培養(yǎng)，**天觀察生長情況。

上海晶抗生物工程有限公司腳踏實地，開拓進取的作風(fēng)，廣聚英才，與時代同步，以提供專業(yè)化的服務(wù)作為我們一直不懈努力的目標(biāo)！我們一直本著以人為本的經(jīng)營理念，一直致力于將人性化的服務(wù)帶給科研工作者。我們感謝所有的客戶，細胞正是由于您們的存在，您們的支持，以及您們不斷提出新的要求，才促使我們在服務(wù)上日臻完善，在技術(shù)上精益求精，我們將一如既往地向新的高度邁進。