做完ELISA試劑盒試劑實驗,測完吸光度,數(shù)據(jù)怎么處理?標準曲線不是直線怎么辦?小晶整理了ELISA試劑盒數(shù)據(jù)處理相關知識,希望對您有幫助。
一、ELISA試劑盒標準曲線分析步驟
1.標曲和樣本孔的每個孔490nmOD值減去1230nm(或970nm)的OD值;
2.再將獲得的標曲和樣本孔數(shù)據(jù)分別減去空白孔Blank的OD值;
3.以標曲的濃度為橫坐標,以這算出的OD值為縱坐標,擬合標曲(選擇R2值大于0.的比較好的擬合方式,必要時可以刪除個別差異較大的標曲點進行擬合);
4.計算樣本值,將樣本減去空白孔的OD值復制,選軟件中的“粘貼”,得到的X值再乘以相應的稀釋倍數(shù)就是終的濃度值。
二、ELISA試劑盒標準曲線擬合方程
1.直線回歸:直線回歸是基本、簡單的回歸分析方法,將所有的測試點擬合為一條直線,其擬合函數(shù)方程式為:y=a+bx。一般實際實驗中線性的情況下直線回歸可以獲得較為理想的R2值,如果直線擬合不理想,可以考慮三次曲線、logistic曲線(四參數(shù))等。
2.logistic曲線(四參數(shù))擬合回歸方程:競爭法和夾心法都可以用到。它要求X值不能小于0(因為指數(shù)是實數(shù),故有此要求)。在很多情況下它都可以擬合ELISA試劑盒的反應曲線,所以它也成了ELISA試劑盒試劑中應用廣的模型之一。
注:曲線擬合方法雖多,要根據(jù)不同類型ELISA試劑盒本身的特點,選擇適合的曲線擬合模型,才能得到合理的實驗結果。一般情況下,需要綜合考慮標準曲線的趨勢走向以及R2值的大小以及樣本落值情況。
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