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上海晶抗生物今日分享:ELISA實(shí)驗(yàn)條件如何選擇
更新時(shí)間:2022-11-17   點(diǎn)擊次數(shù):1167次

ELISA試劑盒中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇十分重要,今日上海晶抗生物就帶您大概了解一下實(shí)驗(yàn)條件的選擇包括哪些:


638030631684964798564.jpg1. 固相載體的選擇:

載體的種類有多種,如聚苯乙烯,聚氯乙烯和纖維素等,我們通常用的聚苯乙烯塑料微量滴定板,其優(yōu)點(diǎn)在于吸附蛋白的性能較好,操作簡(jiǎn)便、用量小、適于大批檢測(cè)。

2. 載體的吸附條件:

載體的吸附均為物理吸附,吸附一般要求PH在9.0~9.6之間。時(shí)間、溫度、蛋白的濃度、離子的強(qiáng)度一定要恰到好處。一般采用4℃過(guò)一夜。   

3. 酶標(biāo)抗體使用濃度的確定:

于聚苯乙烯板中加足夠的抗體包被溫育一定時(shí)間, 酶標(biāo)結(jié)合物倍比稀釋,找出OD值1,為zui合適酶標(biāo)抗體稀釋度。 

4. 抗原的要求:

用于ELISA的抗原必須采用相當(dāng)純的抗原,如果含有其它雜質(zhì),將與抗原共同競(jìng)爭(zhēng)的固相載體上的有限位置。

5. 抗體的要求:

一定是要與抗原對(duì)應(yīng)的抗體,化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)上其具有很高特異性反應(yīng)。

6. 反應(yīng)時(shí)間:

抗原與抗體、抗體與酶標(biāo)抗體反應(yīng)一般在37度1~2小時(shí)達(dá)到高峰。時(shí)間太短敏感性下降,時(shí)間太長(zhǎng)吸附的抗原或復(fù)合物可能脫落。


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