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超濾離心管是否可以重復(fù)使用
更新時間:2022-04-14   點擊次數(shù):1560次

超濾離心管就是一個簡單的可以承受高轉(zhuǎn)速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀。離心超濾管(也叫超濾離心管)會有一個類似于內(nèi)管和外管的兩個部分,內(nèi)管中是帶有一定分子量的膜,當(dāng)高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內(nèi)管中),就是超濾的原理,常用于濃縮樣品。


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使用注意事項

超濾離心管的分子量選擇

按照樣品量和目標(biāo)分子量選擇適當(dāng)?shù)碾x心超濾管,為了得到的收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過目標(biāo)分子量的一半。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。


如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的離心超濾管多次重復(fù)加樣離心。如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),可將待濃縮樣品稀釋到離心超濾管容積再離心,重復(fù)2次可除去99%鹽。避免過長時間或者過速離心,雖然高品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過度濃縮,終體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。


離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。


離心超濾管、超濾離心管是否要預(yù)處理

離心超濾管通常不需要預(yù)處理即可使用,不過對于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時候,會有問題。非特異結(jié)合的程度隨著個別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同。含有帶電的或者疏水結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結(jié)合到不同表面。


對超濾離心管表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,大多數(shù)情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率,因為溶液可填滿膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點。鈍化的方法是預(yù)先用容積的鈍化溶液預(yù)浸泡柱子1小時以上,蒸餾水*沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以*除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用,需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。


常用的鈍化溶液可選擇:


1、1%牛血清白蛋白磷酸緩沖液溶液


2、5%十二烷基磺酸鈉蒸餾水水溶液


3、5%Tween-20非離子活性劑蒸餾水溶液


4、5%Triton-X 蒸餾水溶液


5、5%聚乙二醇化合物蒸餾水溶液


6、1%免疫球蛋白IgG磷酸緩沖液溶液


超濾離心管因為需要高速離心,某些對剪切力或壓力誘導(dǎo)下易變性的不穩(wěn)定樣品可能不太適合。另外超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜容易堵,對于有微小顆?;蛘咚槠臉悠?,能先用較大孔徑的離心超濾管過濾一次,再進(jìn)行下一步濃縮。


超濾離心管是否可以重復(fù)使用

離心超濾管通常不能消毒再次性使用。由于單管價格并不便宜,不少人嘗試重復(fù)使用----經(jīng)驗是用蒸餾水清洗膜表面多次,離心一次到兩次,那種可以反向離心的小管子可以加蒸餾水浸泡后反向多離心一次,會好些??芍貜?fù)用于同一樣品,不用時可用蒸餾水浸泡,但是要防止細(xì)菌污染。不同樣品就不要混用了。有人說泡在20%酒精、1N的NaOH(氫氧化鈉)中,防止長菌,而且防干,只要超濾膜侵了水,就不可以再讓它干,但也有人說會破壞膜結(jié)構(gòu)。反正廠家一般不支持重復(fù)用。多次重復(fù)使用會堵塞濾膜上的孔徑,甚至出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,影響實驗結(jié)果。


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