動物酶免試劑盒系由預(yù)包被豬藍耳病毒重組蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬藍耳病毒抗體。 實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬藍耳病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;
再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);
加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)?用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬藍耳病毒抗體。
下面讓我們一起來了解一下動物酶免試劑盒的使用方法吧
一、樣品準(zhǔn)備
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
二、檢驗方法
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
