1.制備細(xì)胞懸液:
關(guān)于懸液培養(yǎng)的細(xì)胞,可直接進(jìn)行下面的過程2(計(jì)數(shù)與核算進(jìn)程)。假設(shè)計(jì)數(shù)目標(biāo)為貼壁生長的細(xì)胞,首要需將培養(yǎng)物按如下過程制備成細(xì)胞懸液。
①停止培養(yǎng),將培養(yǎng)液吸出,用PBS洗培養(yǎng)物一次。
②給培養(yǎng)瓶內(nèi)參加1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。期間不斷在鏡下調(diào)查。當(dāng)細(xì)胞變圓挨近脫壁時(shí),棄消化液。
③參加一定量的培養(yǎng)液(假設(shè)這些培養(yǎng)細(xì)胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使細(xì)胞脫壁而制成細(xì)胞懸液。
2.計(jì)數(shù)與核算進(jìn)程
①在細(xì)胞計(jì)數(shù)板中心放置計(jì)數(shù)的蓋玻片。
②用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計(jì)數(shù)板凹蹧處流出懸液,至蓋玻片被液體充滿停止。
③置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。關(guān)于壓線的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線和左線者,關(guān)于細(xì)胞團(tuán)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。
④按下式計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的密度:細(xì)胞密度=(4個(gè)大格細(xì)胞總數(shù)/4)×104個(gè)/ml 。
二、注意事項(xiàng):
①必須使松散成單個(gè)細(xì)胞,取樣計(jì)數(shù)前,充分混勻細(xì)胞懸液。
②顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí),遇到2個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞核算。假設(shè)細(xì)胞團(tuán)>10%,闡明細(xì)胞松散不充分。
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