多克隆抗體能識別任一抗原上的多個表位,而單克隆抗體僅檢測任一抗原上的一個表位。兩者都是各有優(yōu)勢,那么我們該選誰呢?來一起看看單抗和多抗的優(yōu)缺點:
【單克隆抗體】
優(yōu)點展示:
1. 雜交瘤制得后,就成為了恒定的再生源,所有批次都將相同–對確保實驗步驟和結(jié)果的一致性和標準化非常有幫助。
2. 單克隆抗體通常在切片和細胞染色造成的背景較低。因為它們以更強特異性檢測一個靶表位,所以不太可能與其它蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。
3. 由于具有特異性,單克隆抗體非常適于用作分析測定中的一抗,或者用于檢測組織中的抗原,并且通常所產(chǎn)生的背景染色顯著低于多克隆抗體。
4. 與多克隆抗體相比,單克隆抗體的同質(zhì)性非常高。如果實驗條件保持不變,單克隆抗體的各實驗結(jié)果重現(xiàn)性很高。
5. 單克隆抗體的特異性能使其在混合物中和抗原地結(jié)合。
不足之處:
·可產(chǎn)生大量特異性抗體,但是可能特異性過強。
·經(jīng)過抗原的化學(xué)處理后比多克隆抗體更易于丟失表位。這可通過使用同一抗原的兩個或多個單克隆抗體進行補償。
【多克隆抗體】
優(yōu)點展示:
1. 克隆抗體可有助于放大低表達水平的靶蛋白信號,因為靶蛋白可在多個表位上結(jié)合不止一個抗體分子。但是這會給定量實驗造成不利影響,因為結(jié)果將變得不準確。
2. 由于能識別多個表位,多克隆抗體可在IP/ChIP中得到更好的結(jié)果。
3. 比單克隆抗體更能容許抗原中的微小變化。
4. 它們會識別出與免疫原蛋白質(zhì)具有高同源性的蛋白質(zhì),或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白,例如當(dāng)未測試物種中的抗原性質(zhì)未知時,有時會使用多克隆抗體。這也使得檢測免疫原序列以確定是否有任何交叉反應(yīng)性非常重要。
5. 多克隆抗體通常是檢測變性蛋白質(zhì)的。
6. 多表位通??商峁└鼮橛辛Φ臋z測。
7. 多克隆抗體不適用于探測抗原的特定結(jié)構(gòu)域,因為抗血清通??勺R別多個結(jié)構(gòu)域。
不足之處:
·易于產(chǎn)生批次間差異。
·產(chǎn)生大量非特異性抗體,有時可能在某些應(yīng)用中產(chǎn)生背景信號。
·多表位使得檢測免疫原序列以確定是否有任何交叉反應(yīng)性非常重要。
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