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我司回答:關于細胞培養(yǎng)的具體步驟有哪些?
更新時間:2020-07-21   點擊次數(shù):1170次

一、復蘇

    
1.把凍存管從液氮中取出來,當即投入37℃水浴鍋中,細微搖擺(留意防止蓋子不緊致使液體進入凍存管)。液體都消融后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。

    
2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
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3.把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖擺,使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。

    
4.標好細胞品種和日期、培養(yǎng)人姓名等,放到37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞貼壁后換培養(yǎng)基。

    
5.依據(jù)細胞增長速度2-3天換一次培養(yǎng)基。
 
    
二、傳代

    
1.培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。

    
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。

    
3.加恰當?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。

    
4.細胞都變圓后參加等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

    
5.用移液槍吹打細胞,讓細胞懸浮起來。

    
6.把細胞吸到10ml或15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

    
7.倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細胞都吹起來。

    
8.依據(jù)細胞品種把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。持續(xù)培養(yǎng)。
 
    
三、凍存

    
把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞品種,凍存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。

    
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