一、直接法
將抗原直接固定在固相載體上,參與酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
1. 優(yōu)勢:操作手續(xù)簡略,因無須運用二抗可防止交互反應。
2. 缺點:試驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費用相對進步。
二、間接法
此測定方法與直接法類似,不相同在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
1. 優(yōu)勢:二抗可以加強信號,而且有多種挑選能做不相同的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它多的免疫反應性。
2. 缺點:交互反應發(fā)作的機率較高。
三、雙抗體夾心法
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其間一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符的二級抗體來測定抗原的量。
1. 優(yōu)勢:高活絡、高專一性,抗原無須事前純化。
2. 缺點:抗原必定得具有兩個以上的抗體部位。
四、根據(jù)細胞法(xin ELISA技能)
是一種新的定性蛋白檢測技能,將細胞直接在微孔板里培養(yǎng),待檢測時,不需抽提蛋白和裂解細胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經影響或抑制作用后的改變。
1. 優(yōu)勢:無需裂解細胞,所以方針蛋白丟掉zui少,可測定完好細胞、黏附細胞、還有非粘附細胞。
2. 缺點:不能測定抗原量。
五、競賽法
樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競賽相同的抗體,當樣品里的自在抗原越多,就可以越多的抗體,而固定抗原就只能到較少的抗體,反之亦然。經清潔進程,洗去自在抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只需固定抗原的對照組成果相比較,依據(jù)呈色區(qū)別就可計算出樣品里的抗原含量。
1. 優(yōu)勢:可適用比較不純的樣本,而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
2. 缺點:整體的敏感性和專一性都較差。
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