酶活測定及酶活調(diào)理的實驗步驟
酶活測定
初速度(initial velocity):酶促反應(yīng)開始階段底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)品的速度,這一階段產(chǎn)品的濃度十分低,其逆反應(yīng)可以疏忽不計。
米氏方程(Michaelis-Mentent equation):透露表現(xiàn)一個酶促反應(yīng)的開始速度(υ)與底物濃度([s])關(guān)系的速度方程:υ=υmax[s]/(Km+[s])
米氏常數(shù)(Michaelis constant):關(guān)于一個給定的反應(yīng),使酶促反應(yīng)的開始速度(υ0)到達(dá)zui大反應(yīng)速度(υmax)一半時的底物濃度。
催化常數(shù)(catalytic number)(Kcat):也稱為轉(zhuǎn)換數(shù)。是一個動力學(xué)常數(shù),是在底物處于飽和形態(tài)下一個酶(或一個酶活性部位)催化一個反應(yīng)有多快的測量。
催化常數(shù)等于zui大反應(yīng)速度除以總的酶濃度(υmax/[E]total)?;蚴敲磕γ富钚圆课幻棵腌娹D(zhuǎn)化為產(chǎn)品的底物的量(摩[爾])。
雙倒數(shù)作圖(double-reciprocal plot):那稱為Lineweaver_Burk作圖。一個酶促反應(yīng)的速度的倒數(shù)(1/V)對底物度的倒數(shù)(1/LSF)的作圖。x和y軸上的截距辨別代表米氏常數(shù)和zui大反應(yīng)速度的倒數(shù)。
酶活調(diào)理
溶菌酶競爭性按捺效果(competitive inhibition):經(jīng)過添加底物濃度可以逆轉(zhuǎn)的一種酶按捺類型。競爭性按捺劑凡間與正常的底物或配體競爭統(tǒng)一個卵白質(zhì)的連系部位。這種按捺使Km增大而υmax不變。
非競爭性按捺效果(noncompetitive inhibition): 按捺劑不只與游離酶連系,也可以與酶-底物復(fù)合物連系的一種酶促反應(yīng)按捺效果。這種按捺使Km不變而υmax變小。
反競爭性按捺效果(uncompetitive inhibition): 按捺劑只與酶-底物復(fù)合物連系而不與游離的酶連系的一種酶促反應(yīng)按捺效果。這種按捺使Km和υmax都變小但υmax/Km不變。
很大一類復(fù)雜的卵白質(zhì)物質(zhì) [enzyme;ferment],在促進(jìn)可逆反應(yīng)(如水解和氧化)方面起著像催化劑一樣的效果。在很多工業(yè)進(jìn)程中是有效的(如發(fā)酵、皮革鞣制及干酪出產(chǎn))
酶是一種有機(jī)的膠狀物質(zhì),由卵白質(zhì)構(gòu)成,關(guān)于生物的化學(xué)轉(zhuǎn)變起催化效果,發(fā)酵就是靠它的效果。
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