ELISA試劑盒的抗體的包被很有講究,這關系到實驗能不能成功,能否取得自己理想的實驗效果。
包被固相載體的抗體應具有高親和力和高特異性,可取材于抗血清或含單克隆抗體的腹水或培養(yǎng)液。如免疫用抗原中含有雜質(即便是極微量的),在抗血清中將出現(xiàn)雜抗體,必須除去(可用吸收法)后才能用于ELISA,以保證試驗的特異性。什么樣的血清不能被直接包被呢?抗血清不能直接用于包被,應先提取IgG,通常采用硫酸銨鹽析和Sephadex凝膠過濾法。一般經硫酸銨鹽粗提的IgG已可用于包被,高度純化的IgG性質不穩(wěn)定。如需用高親和力的抗體包被以提高試驗的敏感性,則可采用親和層析法以除去抗血清中含量較多的非特異性IgG。腹水中單抗的濃度較高,特異性亦較強,因此不需要作吸收和親和層析處理,一般可將腹水作適當稀釋后直接包被,必要時也可用純化的IgG。應用單抗包被時應注意,一種單抗僅針對一種抗原決定簇,在某些情況下,用種單抗混合包被,可取得更好的效果。
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