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原位免疫PCR的原理
更新時(shí)間:2019-07-26   點(diǎn)擊次數(shù):1146次

原位免疫PCR的原理

 
(一)基本原理

    Sano等(1992)利用基因工程的方法表達(dá)了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功,建立了免疫PCR技術(shù)。這是一種新的抗原檢測(cè)系統(tǒng),利用細(xì)胞工程和基因工程技術(shù),巧妙地將抗原抗體反應(yīng)的特異性同PCR的敏感性相結(jié)合,通過(guò)構(gòu)建單克隆抗體與重組核酸的嵌合體分子,使得利用PCR技術(shù)檢測(cè)蛋白成為可能。隨后在免疫PCR的基礎(chǔ)上,建立了在細(xì)胞或組織原位檢測(cè)抗原的原位免疫PCR(in situ immuno-PCR)。


    原位免疫PCR是一種檢測(cè)系統(tǒng),需要一種中介分子同時(shí)具有與DNA和抗體分子特異性結(jié)合的能力,其一端連接DNA,另一端連接抗原-抗體復(fù)合物,形成一個(gè)抗原-抗體-DNA連接物。作為標(biāo)記的DNA分子用PCR擴(kuò)增,檢測(cè)特異的PCR產(chǎn)物,即可間接證明抗原的存在。該技術(shù)與原位PCR不同,就是在PCR與原位雜交之間加了抗體的因素。原位PCR是先對(duì)切片或涂片進(jìn)行PCR,以對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的DNA或RNA進(jìn)行擴(kuò)增,使其拷貝數(shù)大大增加,然后再進(jìn)行原位分子雜交。而該技術(shù)是先用特異性抗體(單抗)與相應(yīng)或目的抗原反應(yīng)。這個(gè)抗體在對(duì)抗原反應(yīng)之前加上了人體不存在的或無(wú)關(guān)的DNA序列。抗體與抗原特異性反應(yīng)后,用PCR擴(kuò)增加在抗體上的DNA序列,然后再用該DNA序列的探針進(jìn)行雜交檢測(cè),也就是說(shuō)用PCR及雜交的方法來(lái)放大免疫組織化學(xué)的反應(yīng),檢測(cè)目標(biāo)是蛋白質(zhì)。

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