淀粉酶活力測定具體操作方法
淀粉酶原理
淀粉被淀粉水解,切斷淀粉鏈的α-1,4糖苷鍵,對dian呈藍(lán)紫色的反應(yīng)消失,這種呈色消逝的速度可以表示水解的程度,因而能衡量酶的活力。
試劑和器材
一、試劑
(1)dian原液:稱取dian11克,dian化鉀22克,加水溶解,稀釋至500毫升。
(2)稀dian液:取dian原液2毫升,加dian化鉀20克,稀釋至500毫升,此試劑隨配隨用。
(3)2%淀粉液:稱取干燥過的可溶性淀粉2克,加5毫升蒸餾水,攪拌混和,再徐徐傾入70毫升煮沸的蒸餾水中。繼續(xù)煮沸2分鐘,冷卻至室溫,加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液(PH為6)
(4)檸檬酸緩沖液:稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)45.23克,檸檬酸(C6H8O7·H2O)8.068克,加水溶解,稀釋至1000毫升。
(5)標(biāo)準(zhǔn)比色液:稱取氯化鈷(CoCL2·6H2O)25克和重鉻酸鉀3.34克溶于100毫升0.01N HCL,其五倍稀釋作標(biāo)準(zhǔn)。
(6)樣品:細(xì)菌-α淀粉酶
二、器材
(1)電熱恒溫水浴 (2)試管
(3)量筒 (4)吸量管(1ml)
淀粉酶操作方法
1、取試管1支,加20毫升2%淀粉,混勻,在30℃水浴中,使管內(nèi)溫度達(dá)到30℃。
2、將淀粉酶0.5ml加到30℃的淀粉液中,混勻,在30℃水浴中保溫,自加入記時,經(jīng)5 分鐘后取反應(yīng)液1毫升,加入盛有5毫升稀dian液的試管中。混勻,目測比色,每隔一定時間重復(fù)測定,直至呈色與標(biāo)準(zhǔn)比色顏色相同為止,記錄反應(yīng)進(jìn)行的時間。
3、計算。在上述條件下,每一小時催化1毫升2%可溶性淀粉水解的酶量,定為一個酶活力單位。
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