今天上班時,公司接到一位elisa實驗朋友的,說雖然之前參考了大量的文獻,但是在準備做的時候還是有一點不知所錯,想請我們幫他歸納一下。
其實做elisa實驗并不困難,只要掌握了它的技術(shù)要點,新手朋友也可以做出的elisa實驗的。下面是我司技術(shù)專員歸納的實驗技術(shù)要點,大家一起來看看吧。
1. 準備好所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等;
2. 根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量;
3. 按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑;
4. 標本制備要規(guī)范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備,盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者,注意低溫保存。
實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。
標準品的配制:對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié),將凍干的細胞因子復溶。
一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml??衫脴藴实腅LISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
為了優(yōu)化靈敏度,建議過一夜孵育標準品和標本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
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