我們在做實驗時,常會遇到elisa試劑盒顯色淡靈敏度偏低的問題,以下是根據(jù)不同問題可能原因及其防止方法總結(jié),僅供參考。
可能原因及防止方法:
1.孵育反應(yīng)時間不足
定時鐘準(zhǔn)確定時
2.洗滌時沖擊力太大,洗滌液浸泡時間太長,洗滌次數(shù)增加
減少洗滌沖擊力,按說明書要求保留洗滌時間,準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)
3.顯色劑滴加量不足或順序顛倒,或混合后加入
滴加顯色液時,滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過快,先加顯色劑 A,反加顯色劑B,不可將A、B液混合后加入
4.顯色劑反應(yīng)時間不足
準(zhǔn)確定時
5.蒸餾水水質(zhì)有問題
測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響
6.試劑盒在運輸途中時間太長,溫度太高
試劑盒置保溫箱內(nèi)運輸,并放足夠數(shù)量的冰塊,盡量縮短運輸時間
7.試劑、樣品用前未能平衡
用前試劑、樣品置室溫平衡 30分鐘左右。
8.樣品和NaN 3 防腐,抑制了酶的反應(yīng)
樣品不能加 NaN 3 防腐
9.試劑盒超過有效期
超過效期試劑盒不要使用
10.試劑開啟時間過長長菌
試劑開啟后請盡量在短時間內(nèi)用完
11.移液器吸量不足,移液抽吸排放太快,吸頭內(nèi)壁掛液太多或內(nèi)壁不清潔
校正移液器,吸頭要配套,每次裝吸頭要吻合緊密。移液不宜過快,排放應(yīng)*。吸頭內(nèi)壁要清潔,一次性使用。
12.恒溫箱溫度不足37℃或水浴鍋水溫度不足37℃)
放入反應(yīng)板時注意培養(yǎng)箱溫度,及時調(diào)整,孵育反應(yīng)期間開啟不宜太多,影響溫度平衡。
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